在现代生物制药研发中，“稳定细胞系”正成为蛋白药物和疫苗生产的核心工具。无论是抗体、重组蛋白，还是病毒载体，稳定细胞系都为科研、药物开发和产业化提供了长期稳定、高效可控的生产平台。那么，什么是稳定细胞系？它是如何开发的？为什么它如此重要呢？

▌什么是稳定细胞系？

稳定细胞系是指通过基因组整合将目标基因永久引入宿主细胞，形成长期、可重复表达目标蛋白的克隆细胞群体。与瞬时转染系统相比，稳定细胞系具有以下优势：

● 长期稳定表达：适合长期实验、药物筛选和大规模生产，无需反复转染。

● 产品均一性高：由单克隆衍生，保证蛋白质量一致，是药物开发质量控制的关键。

● 工艺可放大：可适应从小规模实验室培养到大型生物反应器生产的扩增需求。

● 成本更可控：避免重复转染试剂消耗和操作成本，尤其在长期生产中更具经济性。

▌稳定细胞系构建的核心流程

稳定细胞系开发是一项技术密集型工作，一般包括以下几个关键步骤：

● 载体与宿主细胞选择

载体设计：选择强启动子（如 CMV、EF1α）、合适信号肽和筛选标记（如嘌呤霉素、GS 系统），优化表达效率。

宿主选择：

CHO 细胞：治疗性蛋白生产标准，类人糖基化，适合大规模生产。

HEK293 细胞：适合科研蛋白、抗原和病毒载体生产。

其他专用细胞系：如 Vero, Jurkat, k562, Raji, HCT116, MC38, PANC1等，用于特定蛋白表达。

● 基因递送与整合

目标基因需稳定整合到宿主基因组中，常用方法包括：

慢病毒转导：效率高，适合分裂及非分裂细胞。

位点特异性整合（CRISPR/Cas9、Flp-In）：将基因插入“安全位点”，降低位置效应，表达更可预测。

电转或化学转染：针对特殊细胞类型或非病毒项目。

● 筛选高表达克隆

单克隆分离：通过极限稀释或流式细胞分选（FACS），确保每个克隆来源于单个细胞。

高通量筛选：利用 ELISA、HTRF 或流式平台快速锁定高表达克隆。

● 表征与稳定性评估

长期稳定性测试：在无筛选压力下连续传代多代，监测生长和蛋白表达水平。

产品特性分析：包括 SDS-PAGE、Western blot、糖基化分析和功能活性检测，确保蛋白质量。

● 细胞库建设与质量控制

构建主细胞库（MCB）和工作细胞库（WCB）

完整 QC 测试：STR 鉴定、无菌、支原体及外源病毒检测

提供即刻可用的稳定资源

▌稳定细胞系在生物制药中的应用

稳定细胞系是蛋白药物和生物制剂开发的重要基石：

● 抗体及片段：IgG、Fab、scFv

● 重组蛋白与酶：细胞因子、抗原、疫苗蛋白

● 病毒载体生产：基因治疗、疫苗研发

● 高毒或高活性蛋白：如某些信号分子或药物候选蛋白

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